生物培養(yǎng)診斷法？實(shí)驗(yàn)室診斷 １．２．１ 普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，３７℃培養(yǎng)１８～２４ｈ，而后進(jìn)行純化培養(yǎng)。挑取分離培養(yǎng)的單菌落，進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。用滅菌接種環(huán)勾取少許純培養(yǎng)物接種于各種生化培養(yǎng)基中，３７℃培養(yǎng)１８～２４ｈ后觀察結(jié)果。那么，生物培養(yǎng)診斷法？一起來(lái)了解一下吧。
診斷微生物學(xué)檢查（1）病料采集：取病畜禽的組織，肝，肺，脾等體液、分泌物及局部病灶的滲出液。（2）鏡檢：對(duì)原始病料涂片進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性。用印度墨汁等染料染色，可見(jiàn)清晰的莢膜。（3）培養(yǎng)：同時(shí)接種鮮血瓊脂和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h，觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，菌落特征、溶血性，并染色鏡檢。（4）生化試驗(yàn)：多殺性巴氏桿菌在48h內(nèi)可分解葡萄糖、果糖、單奶糖、蔗糖和甘露糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。一般不發(fā)酵乳糖、山虧扮鼠李糖、菊糖、水楊苷和肌醇。可產(chǎn)生硫化氫，能形成靛基質(zhì)，MR和V-P試驗(yàn)均為陰性。接觸酶和氧化酶試驗(yàn)均為陽(yáng)性。溶血性巴氏桿菌不產(chǎn)生靛基質(zhì)，能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸。能發(fā)酵葡空磨萄糖、糖元、肌醇、麥芽糖、淀粉；不發(fā)酵側(cè)金盞花醇、菊糖和赤蘚醇。動(dòng)物試驗(yàn)常用的試驗(yàn)動(dòng)物有小鼠和家兔。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡后立即剖檢，并取心血和實(shí)質(zhì)臟器分離和涂片染色鏡檢，見(jiàn)大量?jī)蓸O濃逗灶染的細(xì)菌即可確診。血清型或生物型鑒定可用被動(dòng)血凝試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)鑒定多殺性巴氏桿菌莢膜血清群和血清型。用間接血凝試驗(yàn)測(cè)溶血性巴氏桿菌的血清型，根據(jù)生化反應(yīng)鑒定該菌的生物型。（以上內(nèi)容是我查到的資料，希望對(duì)你有所幫助！）
臨床上疑似白喉的病人不必等待檢驗(yàn)結(jié)果，應(yīng)立即給予抗毒素和抗生素治療。但對(duì)于白喉流行期的首例病人應(yīng)做微生物學(xué)檢驗(yàn)予以證實(shí)。
直接染色鏡檢
用棉拭采取假膜邊緣部滲出物，涂片，用奈瑟氏染色或美蘭染色，鏡檢有無(wú)含異染顆粒的棒狀桿菌。結(jié)合臨床癥狀，可作出初步診斷。確診必須通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)并進(jìn)行毒力試驗(yàn)旅搏。
凝固血清棉拭培養(yǎng)法
將沾有馬或牛血清的棉拭子放在無(wú)菌試管內(nèi)，經(jīng)8～10磅蒸氣滅菌20～30分鐘，并使血清凝固，且此凝固血清棉拭采取病人咽部標(biāo)本，置37℃培養(yǎng)8～10小時(shí)后，直接涂片鏡檢。此法可作為大量檢查時(shí)快速培養(yǎng)診斷之用。
培養(yǎng)檢查
將棉試檢材接種于雞蛋斜面或Loeffer''''s血清凝固斜面培養(yǎng)基及亞碲酸鉀平板培養(yǎng)基上，置37℃培養(yǎng)，拆哪祥待斜面或平板上長(zhǎng)出典型的灰色疑菌落，挑取轉(zhuǎn)種到雞蛋呀或血清斜面進(jìn)行分離培養(yǎng)，以供進(jìn)一步形態(tài)染色或毒力試驗(yàn)鑒定。
毒力試驗(yàn)
1．豚鼠試緩空驗(yàn) 取體重250g 豚鼠2只，其中一只試驗(yàn)前12小時(shí)，由腹腔注射白喉抗毒素250～500單位，供做對(duì)照。然后對(duì)照。然后各于皮下注射48小時(shí)的培養(yǎng)液2ml，若于2～4天注射抗毒素的豚鼠死亡，而對(duì)照豚鼠存活，便證明所試驗(yàn)菌株為有毒白喉?xiàng)U菌。
疑似炭疽死亡動(dòng)伍虧物的尸體，應(yīng)盡快自末梢血管（耳尖、腔兆神尾尖等）采血，涂片染色鏡檢，取血后應(yīng)立即用烙鐵將創(chuàng)口烙焦，以止血封口。由于病尸體內(nèi)的炭疽桿菌暴露于空氣中，接觸了氧，氣溫又不適宜其生長(zhǎng)時(shí)，就會(huì)形成芽孢，所以尸體嚴(yán)禁剖檢。
（1）涂片鏡檢取標(biāo)本涂片進(jìn)行革蘭氏染色，發(fā)現(xiàn)有莢膜的呈竹節(jié)狀排列的革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，結(jié)合臨床癥狀可作出初步診斷。陳舊病料可以看到“菌影”，確診須做分離培養(yǎng)和動(dòng)物接種。
（2）分離培猜坦養(yǎng)取病料接種普通瓊脂或血液瓊脂，37℃培養(yǎng)18-24h，觀察有無(wú)典型的炭疽桿菌菌落，同時(shí)革蘭氏染色鏡檢。
（3）動(dòng)物試驗(yàn)將待檢材料或培養(yǎng)物用生理鹽水做適當(dāng)稀釋和磨勻后，皮下注射小鼠0、1-0、2ml,如為炭疽，多在18-24h因敗血病死亡。剖檢可見(jiàn)注射部位皮下膠樣水腫，脾臟腫大。取臟器涂片鏡檢，如發(fā)現(xiàn)有莢膜竹節(jié)狀大桿菌，可確診。
（4）血清學(xué)試驗(yàn)常用炭疽環(huán)狀沉淀試驗(yàn)（Ascoli氏反應(yīng)）。方法是：在一支小玻璃管內(nèi)把疑為炭疽病死亡動(dòng)物尸體組織的浸出液與特異性炭疽沉淀素血清重疊，若二液接觸面產(chǎn)生灰白色沉淀環(huán)，即可診斷。
實(shí)驗(yàn)室診斷
１．２．１
普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，３７℃培養(yǎng)１８～２４ｈ，而后進(jìn)行純化培養(yǎng)。挑取分離培養(yǎng)的單菌落，進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。用滅菌接種環(huán)勾取少許純培養(yǎng)物接種于各種生化培養(yǎng)基中，３７℃培養(yǎng)１８～２４ｈ后觀察結(jié)果。將細(xì)菌純培養(yǎng)物用無(wú)菌生理鹽水洗下，稀釋成３×１０１１個(gè)／ｍｌ的菌懸液，用無(wú)菌棉拭子蘸取稀釋液均勻涂布于普通平板，經(jīng)室溫干燥３～５ｍ乎坦ｉｎ后，每塊平板貼藥敏紙片３片，３７℃培養(yǎng)１８～２４
２２．１坦頃爛
ｈ。
結(jié)果
剖檢病變
剖檢可見(jiàn)病雞胸腔、腹腔內(nèi)有大量
黃色干酪樣滲出物；心包積液，心臟有纖維素性滲出物；肝臟腫大，表面瘀血，有纖維素性滲出物；肺臟瘀血，表面的纖維素性滲出物明顯；氣囊混濁、變厚；腎瘀血、質(zhì)脆，一觸即爛；脾臟瘀血。
２．２病理組織學(xué)變化鏡下觀察，可見(jiàn)肝臟有蛋白質(zhì)纖維膜，肝細(xì)胞變性，竇狀隙內(nèi)紅細(xì)胞增多，肝臟瘀血（圖１）；腎臟病變比較嚴(yán)重，腎小管上皮細(xì)胞壞死，脫離基底膜，腎小管管腔內(nèi)混有脫落的上皮細(xì)胞和滲出物（圖２）；肺表面肺泡細(xì)胞塌陷，外有蛋白質(zhì)纖維膜，肺血管內(nèi)有大量紅細(xì)胞聚集，肺瘀血
（圖３）。
病理剖檢對(duì)送檢的２５只病死雞進(jìn)行了病
取病死雞心、肝、脾、肺、
理剖檢及大體病變的觀察。１讓漏．２．２組織病理學(xué)檢查
腎等器官病健交界處部分組織塊，置于１０％福爾馬林中固定，經(jīng)乙醇脫水后，二甲苯透明、浸蠟，將組織在ＢＭＪ一１生物組織包埋機(jī)下包埋成石蠟塊，用ＡＯ一８２５０型組織切片機(jī)切片，厚度為５肛ｍ，ＨＥ染色，顯微鏡觀察并照相。
病原微生物種類(lèi)繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗(yàn)技術(shù)也在不斷發(fā)展前進(jìn)著。目前，應(yīng)用比較廣泛的病原微生物檢測(cè)方法主要有直接涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、生化反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)、核酸分子雜交、基因芯片、多聚酶鏈反應(yīng)等，該文對(duì)這些檢測(cè)技術(shù)進(jìn)展做一綜述。 對(duì)人和動(dòng)物具有致病性的微生物稱(chēng)為病原微生物，又稱(chēng)病原體，有病毒、細(xì)菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過(guò)敏、腫瘤、癡呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來(lái)出現(xiàn)的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強(qiáng)，往往造成世界性大流行，因此對(duì)病原體的檢測(cè)必須做到快速、準(zhǔn)確。常規(guī)病原學(xué)檢測(cè)方法操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，而且對(duì)操作人員技術(shù)水平要求比較高。隨著醫(yī)學(xué)微生物學(xué)研究技術(shù)的不斷發(fā)展，病原學(xué)診斷已不再局限于病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測(cè)手段不斷出現(xiàn)并被應(yīng)用于臨床和實(shí)驗(yàn)室 J。核酸分子雜交毀握技術(shù)、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)等檢測(cè)方法，自動(dòng)化程度高，快速省時(shí)、無(wú)污染、結(jié)果精確，可以準(zhǔn)確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統(tǒng)的病原微生物的檢測(cè)方法傳統(tǒng)的病原微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢查以染色、培養(yǎng)、生化鑒定等為主，將標(biāo)本直接涂片染色鏡檢和接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行分離培養(yǎng)是對(duì)細(xì)菌或真菌感染性疾病進(jìn)行病原學(xué)診斷的常用方法。
以上就是生物培養(yǎng)診斷法的全部?jī)?nèi)容，選擇培養(yǎng)一般是通過(guò)觀察微生物的同化作用類(lèi)型或某一特征進(jìn)行間接判斷，得到的微生物往往并不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特征從而對(duì)其分類(lèi)。使用鑒別培養(yǎng)基。即根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)。
